Fixadores são substâncias químicas que mantêm a integridade do tecido, sem alterações da estrutura celular. As finalidades básicas dos fixadores são:
- Evitar o máximo de alterações da constituição química celular;
- Fixar proteínas e inativar enzimas proteolíticas, o mais rápido possível, pois são as responsáveis pelos fenômenos da autólise;
- Permitir o estudo da celular ou tecido.
No entanto, por melhor que seja o fixador, sempre ocorrerá contração e diminuição de volume (entre 10 a 40%), dependendo do fixador empregado. Para a escolha do fixador, deve-se levar em conta a velocidade de penetração nos tecidos e a finalidade do exame a ser realizado. Para adequada fixação, é necessário que o volume do fixador seja de 10 a 30 vezes maior que o tecido nele mergulhado.
O tempo de fixação depende do fixador e da temperatura em que este se encontra. Para exames de urgência e corte imediatos, por exemplo, pode se utilizar formalina ou formal aquecido em 50ºC por 1 hora. A temperatura aumenta a velocidade de fixação, ampliando a penetração do fixador através do tecido. Quanto mais elevada ela for, mais rápida será a penetração, porém pode haver prejuízo no que diz respeito a preservação estrutural. Para uma boa fixação, o formol em temperatura ambiente requer um tempo médio de 6 a 48 horas para exercer sua atividade. Frequentemente os fixadores são constituídos de um principal associado a duas ou mais substâncias, fixadoras ou não, corrigindo uma o defeito da outra.
Os principais fixadores são:
- acetona;
- ácido acético;
- ácido ásmico
- ácido pícrico
- ácido etílico;
- ácido metílico;
- aldeído fórmico(formaldeído);
- aldeído glutárico;
- bicloreto de mercúrio;
- cromatos;
- permanganato de potássio.
Formol
O aldeído fórmico, é encontrado comercialmente sob a forma de solução aquosa (formol puro), saturado na proporção de 36 a 40% de aldeído fórmico gasoso. Formol, ou formalina, é o fixador mais usado por permitir o uso dos principais métodos de coloração de rotina, embora não seja o melhor preservador das estruturas celulares para microscopia se submetido ao longo período de fixação. Contudo o tecido ou órgão pode permanecer nele por mais 10 anos sem grandes modificações em sua estrutura. Em geral, o formol é usado em solução aquosa a 10%. Uma solução mais concentrada tem a desvantagem de endurecer demais os tecidos.
Quando exposto à luz, o formol se transforma em ácido fórmico, o qual provoca maiores alterações teciduais, principalmente se a preparação for corada com compostos de prata. Para evitar ou neutralizar o ácido fórmico, recomenda-se o tratamento pelo carbonato de cálcio ou magnésio, ou empregam-se fixadores tamponados.
Alterações celulares frequentes consequentes a fixação pelo formol:
- Nos tecidos, as células tendem a se separar uma das outra, tornando-se mais isoladas;
- As mitocôndrias nem sempre são preservadas;
- O citoplasma se contrai em relação ao núcleo;
- Nas mitoses os cromossomos são mal fixados.
Preparação
Formol 10%
Aldeído fórmico (37-40%)......100ml
Água destilada……………….900ml
Formol 10% tamponado
Aldeído fórmico (37-40%)......100ml
Água destilada……………….900ml
Fosfato monossódico……....4g
Fosfato dissódico…………...4,5g
Referências:
1 - Becker, P. F. L. Manual de Patologia Cirúrgica. Rio de Janeiro: RJ; Editora Guanadara Koogan, 1977.
2 - Behmer, O. A. et al. Manual de técnicas para histologia normal e patológica - 2.ed.-Barueri, SP : Manole,2003.
3 - Manual de Laboratório cito-histopatológico: Normas e Manuais Técnicos. Ministério da Saúde, 1997.
4 - VASSALLO, J. Controle de qualidade e acreditação no laboratório de anatomia patológica/José Vassallo. -- São Paulo: Sociedade Brasileira de Patologia, 2003.