A
malária continua sendo um problema de saúde pública e dentre as formas
graves da doença encontra-se a malária esplênica ocasionada,
principalmente, pelo Plasmodium vivax. O diagnóstico padrão ouro é a
gota espessa, porém apresenta limitações como necessidade de
microscopistas treinados, leitura difícil e cansativa, etc.,
dificultando o controle efetivo da malária. O objetivo do estudo foi
padronizar cortes histológicos de baço a serem usados como fonte de
material biológico para o diagnóstico molecular da malária humana. Foi
selecionado uma amostra de baço incluída em parafina sabidamente
positiva para P.vivax, foi realizado a microtomia com diferentes
quantidades e espessuras, sendo seis, oito, dez, quinze, vinte e vinte e
cinco cortes histológico com espessura 10 μm e outros cinco e dez
cortes com espessura de 20 μm. Foi realizado a desparafinização com
xilol e etanol e álcool 70% ,foi testado uma lavagem com xilol uma com
etanol absoluto e uma com álcool a 70%. Uma lavagem de xilol e uma de
etanol retirando o álcool 70% e posterior duas lavagens de xilol e
etanol, após a desparafinização os tecidos foram secos em temperatura
ambiente e pesados em balança analítica. A extração de DNA foi feita com
kits comerciais sendo um especifico para sangue (DNA Blood Minikit) e o
outro para tecido (QIAamp FAST DNA Tissue kit) . Foi realizada a qPCR
para Plasmodium sp. com alvo no gene 18S e P. vivax em regiões
conservadas do gene PvmtCOX1. Então, foram selecionadas amostras do
anode 2021de um laboratório referência para exame histopatológico em
Manaus, Amazonas para serem analisadas como teste, as amostras foram
testadas para gênero especifico,e espécie especifico de Plasmodium sp. e
também para DNA humano. Padronizou-se cortes histológicos, bem como a
desparafinização e método de extração de DNA. A amostra com dez cortes e
espessura de 20 μm desparafinada com duas lavagens de xilol e duas de
etanol absoluto com peso de 40 mg, com o DNA extraído a partir de ambos
os kits, com concentração de DNA de 50ng/μL para kit de sangue e55ng/μL
para kit de tecido apresentou-se positiva na qPCR para gênero e espécie
especifico. E a amostras analisadas como teste apresentaram-se negativa
na qPCR para gênero e espécie espécifico e positiva para DNA humano.
Palavras-chave: Esplênica. Malária. Plasmodium vivax. Extração DNA. Diagnóstico.
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