O coronavírus 2 da síndrome respiratória aguda grave (SARS-CoV-2), a causa da doença do coronavírus humano 2019 (COVID-19), surgiu em Wuhan, China em dezembro de 2019. O vírus se espalhou rapidamente em todo o mundo, resultando em uma crise de saúde pública, incluindo mais de 3,1 milhões de casos e 224.000 mortes em 1 de maio de 2020. Aqui, descrevemos a identificação e avaliação de reagentes e ensaios disponíveis no mercado para a detecção molecular de SARS-CoV-2 e em pellets de células infectadas fixadas em formalina e embebidas em parafina (formalin fixed paraffin embedded-FFPE). Identificamos um anticorpo policlonal de coelho de proteina spike anti-SARS-CoV adequado e um anticorpo monoclonal de camundongo da proteína nucleocapsídeo (NP) anti-SARS-CoV para detecção cruzada das respectivas proteínas SARS-CoV-2 por imunoistoquímica(IHC) e ensaio de imunofluorescência (IFA). A seguir, estabelecemos RNAscope de hibridação in situ (ISH) para detectar RNA SARS-CoV-2. Além disso, estabelecemos um ISH de fluorescência multiplex de hibridação in situ (mFISH) para detectar RNA SARS-CoV-2 de sentido positivo e RNA SARS-CoV-2 de sentido negativo (um intermediário replicativo indicando replicação viral). Finalmente, desenvolvemos um ensaio de dupla coloração usando IHC e ISH para detectar o antígeno SARS-CoV-2 e o RNA na mesma seção do FFPE. Estes reagentes e ensaios irão acelerar os estudos de patogênese do COVID-19 em humanos e em modelos animais do COVID-19. Finalmente, desenvolvemos um ensaio de coloração dupla usando IHC e ISH para detectar o antígeno SARS-CoV-2 e o RNA na mesma seção do FFPE. Estes reagentes e ensaios irão acelerar os estudos de patogênese do COVID-19 em humanos e em modelos animais do COVID-19.
Autores:
Jun Liu (1)
April M Babka (1)
Brian J Kearney (2)
Sheli R Radoshitzky (3)
Jens H Kuhn (4)
Xiankun Zeng (1)
1. Department of Pathology, United States Army Medical Research Institute of Infectious Diseases, Frederick, United States of America.
2. Division of Diagnostics, United States Army Medical Research Institute of Infectious Diseases, Frederick, United States of America.
3. Division of Molecular and Translational Science, United States Army Medical Research Institute of Infectious Diseases, Frederick, United States of America.
4. Integrated Research Facility at Fort Detrick, National Institute of Allergy and Infectious Diseases, NIH, Frederick, United States of America.
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